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大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA試劑盒實驗原理
發(fā)布時間:2025/9/22瀏覽:195次
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  大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA試劑盒實驗原理

  大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA試劑盒的實驗原理主要基于?雙抗體夾心法?,通過特異性抗體捕獲目標(biāo)蛋白并顯色定量。以下是詳細(xì)解析:

  一、核心檢測原理

  抗體包被?

  試劑盒預(yù)包被抗Ki-67蛋白的單克隆抗體于酶標(biāo)板微孔中,形成固相捕獲層?。

  抗原-抗體結(jié)合?

  樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中的Ki-67蛋白與包被抗體特異性結(jié)合,形成“抗體-抗原"復(fù)合物?。

  信號放大?

  加入生物素標(biāo)記的二抗(抗Ki-67多克隆抗體),與已結(jié)合的抗原形成“抗體-抗原-二抗"復(fù)合物?。

  通過鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶(SA-ABC)系統(tǒng)進(jìn)一步放大信號?。

  顯色與定量?

  加入TMB顯色底物后,酶催化反應(yīng)生成藍(lán)色產(chǎn)物,終止液變黃,在450nm波長下檢測吸光度(OD值),Ki-67濃度與OD值呈正比?。

  二、關(guān)鍵組分與流程

  試劑盒組分?:包被抗體、生物素化二抗、SA-ABC復(fù)合物、TMB底物、終止液等?。

  操作步驟?:

  樣本稀釋與加樣

  37℃孵育(通常1小時)

  洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)

  加入二抗與SA-ABC復(fù)合物

  顯色反應(yīng)后終止并讀數(shù)

  三、技術(shù)特點

  高特異性?:雙抗體夾心法可減少交叉反應(yīng),提高檢測準(zhǔn)確性?。

  靈敏度?:檢測范圍通常為0.312-20ng/mL,適用于低豐度蛋白檢測?。

  標(biāo)準(zhǔn)化?:需通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本濃度,確保結(jié)果可比性?。

  四、注意事項

  樣本處理?:避免反復(fù)凍融,建議使用新鮮組織或血清樣本?。

  干擾因素?:高濃度內(nèi)源性生物素或異嗜性抗體可能影響結(jié)果,需通過稀釋或阻斷劑處理?。

  注:僅供科研使用,以上資料供參考,如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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