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　　小鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書

　　BS-9437 小鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒

　　一、產(chǎn)品概述

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法原理，專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)的濃度?。LBP作為急性期蛋白，在炎癥反應(yīng)中具有雙重調(diào)控作用，其檢測對研究免疫防御機(jī)制及病理過程具有重要意義?。

　　二、實(shí)驗(yàn)原理

　　捕獲抗體包被?：抗小鼠LBP單抗體預(yù)包被于微孔板形成固相載體?。

　　抗原-抗體復(fù)合物形成?：樣本中LBP與捕獲抗體結(jié)合，加入生物素標(biāo)記的檢測抗體形成"三明治"結(jié)構(gòu)?。

　　信號放大?：加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素結(jié)合實(shí)現(xiàn)信號放大?。

　　顯色檢測?：TMB底物顯色后，通過450nm波長測定吸光度值，濃度與OD值呈正相關(guān)?。

　　三、試劑盒組分

　　| 組分 | 規(guī)格(96T) | 保存條件 |

　　| 預(yù)包被酶標(biāo)板 | 8×12條 | 2-8℃ |

　　| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 6濃度梯度 | -20℃ |

　　| 生物素標(biāo)記抗體 | 120μL | -20℃ |

　　| 酶標(biāo)復(fù)合物 | 12mL | 2-8℃ |

　　| TMB顯色液 | A/B液各6mL | 2-8℃避光 |

　　| 終止液 | 12mL | 室溫 |

　　| 濃縮洗滌液 | 60mL | 室溫 |

　　四、樣本處理

　　血清/血漿?：

　　血清：室溫靜置30min，2000×g離心15min，避免溶血?。

　　血漿：EDTA抗凝，3000×g離心20min，去除血小板。

　　組織樣本?：

　　稱取100mg組織，加入1mL PBS勻漿，反復(fù)凍融3次裂解細(xì)胞?。

　　12000×g離心10min取上清。

　　細(xì)胞上清?：

　　離心去除細(xì)胞碎片，上清液直接檢測或凍存?。

　　保存條件?：

　　短期：2-8℃(≤48h)

　　長期：-20℃(≤1月)或-80℃(≤3月)，避免反復(fù)凍融?。

　　五、操作流程

　　試劑準(zhǔn)備?：

　　濃縮洗滌液按1:20稀釋(示例：1mL濃縮液+19mL蒸餾水)?。

　　標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：取6支EP管，依次加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200μL，倍比稀釋?。

　　加樣反應(yīng)?：

　　每孔加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品50μL，空白孔不加。

　　37℃孵育60min，洗滌5次(每次靜置1min)。

　　檢測步驟?：

　　加入生物素標(biāo)記抗體100μL，37℃孵育30min。

　　加入酶標(biāo)復(fù)合物100μL，37℃避光孵育20min。

　　加入TMB底物100μL，避光顯色15min。

　　加入終止液50μL終止反應(yīng)。

　　讀數(shù)?：

　　450nm波長測定OD值，參考630nm校正值?。

　　六、結(jié)果分析

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度對數(shù)為橫軸，OD值為縱軸繪制四參數(shù)擬合曲線?。

　　樣本計(jì)算?：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程計(jì)算樣本濃度，乘以稀釋倍數(shù)?。

　　檢測范圍?：0.156-10ng/mL(實(shí)際以說明書為準(zhǔn))?。

　　靈敏度?：低檢測限≤0.078ng/mL?。

　　七、注意事項(xiàng)

　　樣本處理?：

　　避免使用溶血、高血脂樣本?。

　　組織樣本需去除污漬?。

　　操作規(guī)范?：

　　加樣時(shí)避免觸及孔壁，保持槍頭垂直?。

　　洗滌需凈，殘留液體會(huì)導(dǎo)致假陽性。

　　試劑保存?：

　　TMB顯色液需避光保存，現(xiàn)配現(xiàn)用。

　　酶標(biāo)板拆封后需密封防潮?。

　　質(zhì)量控制?：

　　建議設(shè)置復(fù)孔檢測，CV值應(yīng)<15%?。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值需≥0.99?。

　　八、常見問題處理

　　| 現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決方案 |

　　| 陰性對照OD值偏高 | 洗滌不凈/樣本污染 | 增加洗滌次數(shù)/更換樣本? |

　　| 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤 | 重新配制標(biāo)準(zhǔn)品? |

　　| 重復(fù)性差 | 加樣不均/孵育時(shí)間不一致 | 使用多道移液器/同步計(jì)時(shí)? |

　　| 顯色過快/過慢 | 室溫波動(dòng)/底物失效 | 控制環(huán)境溫度/更換底物 |

　　九、安全聲明

　　本試劑含疊氮鈉(NaN?)，避免接觸皮膚或吸入?。

　　終止液含強(qiáng)酸，操作時(shí)佩戴防護(hù)手套?。

　　注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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