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小鼠白介素22(IL-22)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說明書
BS-9441小鼠白介素22(IL-22)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品概述
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，專用于小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-22的特異性定量檢測(cè)。其核心原理為：預(yù)包被于微孔板的IL-22單克隆捕獲抗體與樣本中的IL-22結(jié)合，隨后加入生物素化檢測(cè)抗體形成夾心復(fù)合物，再通過鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物催化TMB顯色，在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值與IL-22濃度呈正相關(guān)?。
二、技術(shù)參數(shù)
檢測(cè)范圍?：31.25-2000pg/mL(典型值)?
靈敏度?：低檢出量22.6pg/mL?
特異性?：與IL-15、IL-20、IL-29等無交叉反應(yīng)?
重復(fù)性?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%?
樣本類型?：血清、血漿、細(xì)胞上清液等?
三、試劑盒組成
組分 規(guī)格 保存條件
預(yù)包被微孔板 96孔/板 2-8℃(避光)
標(biāo)準(zhǔn)品(凍干) 6濃度梯度 -20℃(長(zhǎng)期)
生物素化抗體 濃縮液(50×) -20℃(長(zhǎng)期)
HRP-鏈霉親和素 濃縮液(50×) -20℃(長(zhǎng)期)
TMB底物溶液 11mL 2-8℃(避光)
終止液(2M H?SO?) 6mL 室溫
20×洗滌緩沖液 50mL 室溫
四、樣本處理規(guī)范
樣本采集
血清?：室溫靜置10-20分鐘，2000-3000g離心20分鐘，取上清?。
血漿?：EDTA抗凝，混合后離心，避免溶血或脂血樣本。
細(xì)胞上清?：離心去除細(xì)胞碎片，建議添加蛋白酶yizhi劑。
保存與稀釋
短期保存?：4℃(≤1周)。
長(zhǎng)期保存?：-20℃(1個(gè)月)或-80℃(3個(gè)月)，避免反復(fù)凍融。
稀釋方案?：高濃度樣本需用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋，推薦梯度稀釋(如100倍、1000倍)。
五、實(shí)驗(yàn)步驟
試劑準(zhǔn)備?
洗滌液：20×濃縮液用蒸餾水稀釋為1×工作液?。
酶結(jié)合物：50×濃縮液用稀釋液配制為1×工作液?。
加樣與孵育?
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37℃孵育1小時(shí)?。
加入生物素化抗體工作液，37℃孵育1小時(shí)?。
洗滌與顯色?
洗滌：每孔加入300μL洗滌液，重復(fù)3次?。
加入HRP-鏈霉親和素工作液，37℃孵育30分鐘?。
洗滌：重復(fù)5次?。
顯色：每孔加入90μL TMB，37℃避光孵育15分鐘?。
終止與讀數(shù)?
加入50μL終止液，450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值?。
六、結(jié)果分析
標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以O(shè)D值為縱坐標(biāo)、IL-22濃度為橫坐標(biāo)，擬合四參數(shù)邏輯函數(shù)曲線?。
樣本濃度?：根據(jù)樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得濃度，若超出范圍需稀釋后重測(cè)?。
七、注意事項(xiàng)
試劑保存?：未使用試劑盒需4℃(6個(gè)月)或-20℃(12個(gè)月)保存，避免反復(fù)凍融?。
樣本質(zhì)量?：避免溶血、高血脂或渾濁樣本，離心后確保上清澄清。
操作規(guī)范?：加樣時(shí)避免氣泡，洗滌需凈;顯色后需及時(shí)終止反應(yīng)?。
質(zhì)量控制?：建議設(shè)立復(fù)孔以提高準(zhǔn)確性，標(biāo)準(zhǔn)曲線需每次實(shí)驗(yàn)重新繪制?。
應(yīng)用范圍?：本試劑盒僅供科研使用。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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